Результаты подсадки к растущей культуре крысиных эмбриональных клеток суспензии клеток саркомы Рауса(1)Было проведено 5 опытов с подсадкой к крысиной культуре саркоматозных клеток штамма Карра и один опыт с подсадкой саркоматозных клеток штамма Энгельбрет-Холма. Саркоматозные клетки подсаживали к крысиным культурам в разные сроки от начала культивирования. матрасы против пролежней Соотношение клеток саркомы с клетками крысиной культуры составляло 1 : 3 — 1 : 6. Смешанные культуры выращивали на обогащенных средах. Использовали следующие сочетания: 1) 80 частей среды 199+20 частей гидролизата лактальбуми-на на растворе Эрла+30 частей нормальной бычьей сыворотки; 2) 50 частей среды 199+50 частей среды Игла+30 частей амниотической жидкости +10 частей нормальной бычьей сыворотки; 3) 50 частей среды 199+50 частей среды Игла+30 частей амниотической жидкости+10 частей триптозофосфатного бульона Дифко. После 1-го пассажа таких культур среду заменяли на смесь из 50 частей среды 199+50 частей среды Игла+10 частей амниотической жидкости + 10 частей нормальной бычьей сыворотки. Время от времени смешанные культуры проверяли на наличие в них саркоматозных клеток окраской по методу Кунса и титрацией культуральной жидкости на цыплятах. К 16-м суткам совместного культивирования клетки саркомы Рауса были немногочисленны — приблизительно одна клетка на 10 полей зрения. При окраске по Кунсу в некоторых культурах они были единичными в препарате. Чистые культуры саркомы Рауса, выращиваемые для контроля на таких же средах, к этому времени практически погибали. Титрация на цыплятах культуральной жидкости из смешанных культур показала присутствие вируса в неразведенной культуральной жидкости в пороговой дозе спустя 12—15 дней совместного культивирования. Это наблюдение является еще одним доказательством того, что рост совместных культур, значительно интенсифицирующийся при подсадке саркоматозных клеток, осуществляется за счет крысиных, а не куриных клеток. Результаты исследования смешанных культур целесообразно изложить отдельно применительно к каждому опыту. 1. Подсадка саркоматозных клеток штамма Карра осуществлена на 9-й день культивирования крысиных фибробластов. Совместное культивирование производили в течение 25 дней. Морфологических изменений в культуре не отмечено. Хотя рост заметно интенсифицировался, клетки сохраняли вид типичных фибробластов. Прививка смешанных культур крысятам к образованию опухолей не привела. 2. Подсадку саркоматозных клеток штамма Карра производили через 12 дней после начала культивирования крысиных клеток. Совместное культивирование длилось 45 дней. Морфологических изменений не произошло. 3. Подсадку саркоматозных клеток штамма Карра производили через 25 дней после начала культивирования. Спустя 12 дней совместного культивирования тип роста культуры начал меняться. В культуре появилось большое количество крупных округлившихся клеток, затем эпителиоидные, полигональные клетки. Вся культура приобрела эпителиоидный характер роста. Клетки начали терять контактную ингибицию: местами наблюдался многослойный рост. К 14-му дню совместного культивирования практически вся культура состояла из крупных полигональных клеток, растущих многослойно. В тот же день клетки ее были сняты трипсином и введены новорожденным инбредным крысятам Wistar. Опухоли не развились. 4. Клетки штамма Карра подсажены через 26 дней после начала культивирования. На 13-й день совместного роста в культуре появились изменения, подобные только что описанным. На 3-й день после начала трансформации клетки культуры введены новорожденным крысятам. Опухоли не развились. 5. Подсадку саркоматозных клеток штамма Карра производили через 35 дней после начала культивирования крысиных клеток. Через 19 дней совместного роста в культуре произошли резкие изменения: за 2 дня рост ее резко усилился, культура стала интенсивно закислять среду, клетки формировались в мелкие многослойные бляшки. Все описанные выше изменения клеток были выражены еще резче. Культуры легко пассировались каждые 4—5 дней и, несмотря на тщательное ресуспендирование в питательной среде при пассаже, продолжали расти мелкими многослойными бляшками. На препаратах, окрашенных гематоксилин-эозином, видна сильная вакуолизация цитоплазмы таких клеток, иногда заметное увеличение размеров ядрышек, базофилия цитоплазмы и утолщение ядерных мембран. Через 11 дней после начала трансформации (на 30-й день совместного культивирования) клетки были привиты новорожденным крысятам Wistar. На 7-й день после прививки у 3 крысят из 6 возникли опухолевые узелки, которые затем рассосались. Трансформированная культура продолжала интенсивно расти в течение 150 дней и закислять среду. Затем она погибла от посторонней причины. Изучение ее при помощи метода Кунса показало отсутствие в клетках вирусного антигена. • Контрольная крысиная культура к этому времени почти прекратила рост, пассировалась с трудом с 2 матрацев на один и росла по типу нормальных фибробластов с признаками старения. 6. Подсадку клеток саркомы штамма Энгельбрет-Холма произвели на 27-й день после начала культивирования крысиных клеток. Через 12 дней после начала совместного культивирования произошла такая же внезапная трансформация культуры, как и со штаммом Карра. Форма и размер многослойных бляшек ничем не отличались от бляшек в культуре со штаммом Карра. Интенсивность роста, закисление среды — все было анало- гично культурам со штаммом Карра. Через 12 дней после начала трансформации (24 дня с момента начала совместного культивирования) клетки привиты новорожденным крысятам Wistar. На 8-й день у 4 из 7 животных замечены опухолевые узелки. Одна из опухолей прогрессировала в росте. Затем она подверглась регрессии. Культуры продолжают пассироваться. Медицинские советы М.Струбциновой
|